首页 科研工具 protocol 消化系统的显微结构观察实验

消化系统的显微结构观察实验

2015-05-26 821 收藏

实验材料

  • 小肠
  • 肝小叶组织结构模型
  • 实验仪器

  • 舌轮廓乳头切片
  • 叶状乳头切片
  • 下颌下腺切片
  • 食管切片
  • 胃体部切片
  • 十二指肠或空肠切片
  • 结肠切片
  • 小肠切片
  • 胰切片
  • 肝切片
  • 肝血管注射切片
  • 肝活体染色切片
  • 肝切片
  • 胆小管切片
  • 胃底腺
  • 小肠上皮细胞切片
  • 肝细胞的电镜图片
  • 实验步骤

    一、味蕾

    用人舌的轮廓乳头或兔舌的叶状乳头切片(H-E染色)观察。

    1.低倍镜观察 找到粘膜的突起部分即舌乳头,可见其上皮为复层扁平上皮,上皮内有许多着色浅的卵圆形味蕾。兔舌的叶状乳头处的味蕾较多,所以容易找到。

    2.高倍镜观察 味蕾为卵圆形,其长径与所在部位的上皮厚度相等。味蕾内有3种细胞:I 型细胞呈梭形,数目少.胞核狭长,着色较深;Ⅱ型细胞为梭形或柱状,数目较多,胞核大而圆,染色浅;Ⅰ、Ⅱ型细胞顶端都有味毛,隐约可见。基细胞为锥体形,位于味蕾基部。若切面正切过味蕾的中部,还可见到味蕾顶端的味孔。

    二、唾液腺的浆液、粘液和混合腺泡

    用狗的下颌下腺切片(H-E染色)观察。只要求观察3种腺泡的结构特点。

    (一)低倍镜观察

    可见腺组织被结缔组织分隔成许多小叶,在小叶内可见许多腺泡和少数导管。

    (二)高倍镜观察

    在高倍镜下寻找3种腺泡。

    1. 浆液腺泡 腺泡形状近似圆形,腺腔很小。胞体呈锥形,胞质着色较深,呈紫红色。胞核圆形,位于细胞基部。

    2.粘液腺泡 腺泡形状为长椭圆形,比浆液腺泡人。胞质着色浅淡,呈浅蓝紫色胞核扁与圆形,位于细胞基底部,接近细胞膜。

    3. 混合腺泡 在粘液腺泡的末端附着有几个排列成半月形的浆液腺泡细胞。

    三、食管

    观察食管、胃、小肠和结肠切片的肌层时,要注意这张切片是纵切还是横切,因为,在不同的切面上所看到的肌层的肌纤维排列方向有所不同。

    用低倍镜观察人的食管切片(H-E染色)。管壁由食管腔向外依次可分为粘膜、粘膜下层、肌层及外膜四层。黄

    1.粘膜粘膜可分二层:上皮为复层扁平上皮;固有层为结缔组织;粘膜肌层为纵行平滑肌,较厚。

    2.粘膜下层 粘膜下层染色较浅,为疏松结缔组织,可见食管腺为粘液腺和混合腺。于

    3.肌层 食管的肌层很厚,大致分内环肌、外纵肌两层。观察并判断你所观察的切片,食管肌层是哪种肌纤维?

    4.外膜 食管外膜为纤维膜,是一层疏松结缔组织。

    在以上各处的结缔组织中,都可看到血管和神经的断面。

    四、胃

    取猫或狗的胃体部切片(H-E染色),并结合胃组织结构模型重点观察胃底腺的结构。

    (一)低倍镜观察

    区分粘膜、粘膜下层、肌层及外膜四层。可见胃的粘膜面呈乳头状的粘膜隆起为粘膜皱璧,它由粘膜及粘膜下层组成。

    1.粘膜 表面为单层柱状上皮,上皮凹陷形成短而阔的胃小凹。上皮细胞的顶部胞质内含有粘原颗粒,在H-E染色切片中此颗粒被溶解,使顶部呈空泡状。

    固有层为疏松结缔组织,其中有大量胃底腺,排列紧密,故腺间固有层结缔组织很少胃底腺为单管腺或分支管状腺,开口于胃小凹。在切片上,胃底腺被切成纵、横、斜各种切面

    粘膜肌层较薄,为内环肌、外纵肌的平滑肌。

    2.粘膜下层 为疏松结缔组织,含有丰富的血管和神经。

    3.肌层 很厚,由平滑肌组成,分内斜肌、中环肌、外纵肌三层。前两层界限不易分清。

    4.外膜 为浆膜,即在薄层的疏松结缔组织外还覆有一层单层扁平上皮(间皮)。

    (二)高倍镜观察

    观察组成胃底腺腺泡的几种细胞。在H-E染色切片中只能区分以下三种细胞:

    1.壁细胞 很大,近似圆形。胞核大而圆,位于中央。胞质为强嗜酸性,被伊红染成深红色。

    2.主细胞 位于壁细胞之间,数日最多,呈柱状。胞核圆形,位于细胞基部。胞质嗜碱性,染成蓝色,细胞界限不清楚。

    3.颈粘液细胞 数量少,位于腺的颈部,多呈楔状,胞核扁圆,位于细胞基部,胞质着色浅。

    (三)示范观察壁细胞和主细胞的电镜结构

    用胃底腺的透射电镜图片观察。壁细胞胞质中有迂曲分支的细胞内分泌小管,管壁与细胞顶面的胞膜相连,有微绒毛,线粒体丰富,其他细胞器不发达。主细胞的核周有大量粗面内质网与发达的高尔基复合体,胞质顶端有许多圆形的酶原颗粒。

    五小肠

    (一)人十二指肠或空肠切片(H-E染色)和小肠组织结构模型的观察

    重点观察小肠绒毛及小肠腺的结构。

    1.肉眼观察 可见粘膜面有数个大突起突向管腔,为粘膜皱襞。它由哪些结构构成?

    2.低倍镜观察 先粗略地观察一下小肠壁的分层,然后再一层一层仔细观察。

    (1)粘膜在整个肠粘膜表面(包括粘膜皱襞的表面)布满许多不规则的细小指状突起,即为小肠绒毛。在切片上,小肠绒毛往往被切成纵、横、斜等各种切面。小肠绒毛表面为单层柱状上皮,上皮深面为固有层的疏松结缔组织。

    在粘膜固有层内可见很多肠腺。肠腺为单直管状腺,常被切成纵、横、斜等切面。肠腺开门于小肠绒毛之间,可以在切片中找到。腺泡由单层柱状上皮组成,中间的腔隙即腺腔。

    固有层中有时可见染成蓝紫色的分散淋巴组织或淋巴小结。

    粘膜肌层为平滑肌,此层较薄,虽分为内环肌、外纵肌两层,但往往不易区分。

    (2)粘膜下层 为疏松结缔组织。若观察十二指肠切片,则在此层中可见十二指肠腺,为粘液腺。在靠近肌层处可见到数个胞核大而圆的细胞群,它是粘膜下神经丛中的副交感节后神经元。

    (3)肌层 为平滑肌,排列成内环肌、外纵肌两层。在环肌和纵肌之间的结缔组织中,同样可见到胞核大而圆的细胞群,这便是肌间神经丛中的副交感节后神经元。

    (4)外膜 十二指肠大部分为一层疏松结缔组织的纤维膜,空肠为浆膜,即在疏松结缔组织外还覆有一层间皮。

    3.高倍镜观察 找一条纵切得比较直的小肠绒毛观察其结构。小肠绒毛表面为一单层柱状上皮,上皮细胞游离面有纹状缘。柱状细胞(吸收细胞)之间散布有杯形细胞。上皮深部是结缔组织,在其中散布有与小肠绒毛长轴平行的平滑肌纤维。小肠绒毛固有层中心可见到一条由层内皮构成的中空管道,即中央乳糜管,在切片中多被切成各种断面。由于制作切片时取材的关系,有时甚至整张切片上都看不到中央乳糜管。在中央乳糜管周围可以看见很多毛细血管的各种断面。

    用高倍镜观察肠腺,可见它也由柱状细胞(吸收细胞)和杯形细胞组成。在有的H-E染色切片中甚至还可区分出肠腺底部的帕内特细胞(Paneth cell)。这种细胞的顶部有被染成深红色的颗粒。

    (二)示范观察猫小肠切片(银染色)

    用低倍镜找到肠腺,再换用高倍镜观察。可见在肠腺的吸收细胞之间,散布有数目不多、呈黑色的小肠内分泌细胞(嗜银细胞)。

    (三)示范观察微绒毛结构

    用小肠上皮细胞透射电镜图片观察微绒毛结构。

    六、结肠

    用人的结肠切片(H-E染色)低倍镜观察。重点观察其粘膜结构并与小肠粘膜进行比较。结肠肠壁也分四层,粘膜无肠绒毛,但有很多肠腺。肠腺为单直管腺,在切片上被切成纵、横、斜各种切面。观察时不要把两个相邻近的肠腺误认为是一条肠绒毛。上皮中杯形细胞很多。若切片切到淋巴小结,可以在固有层中看到,它常扩展伸至粘膜下层。

    七、胰

    取人或豚鼠胰切片(H-E染色)观察,重点区分腺泡及胰岛,并了解胰岛结构。

    1.低倍镜观察 可见少量结缔组织伸人胰腺实质内,将胰分成很多小叶。小叶内有许多染色较深的浆液腺泡及少数小叶内导管,这些是胰的外分泌部。在腺泡之间可见大小不一、色淡的细胞团为胰岛,它是胰的内分泌部。在胰的结缔组织中,有时可切到环层小体,它为内脏感受器。

    2.高倍镜观察 浆液腺泡的结构基本上和唾液腺的相似。不同之处是在腺泡腔中可见立方形或较扁的小细胞,为泡心细胞,其胞核扁圆,胞质着色较淡。

    胰岛细胞排列成团索状,并彼此连接成网。细胞间散布有毛细血管。胰岛细胞的胞核都为圆形,在H-E染色切片中着色较深的为A细胞。在胰岛内还有一些染色较深、扁平或梭形的成纤维细胞夹杂其间。要用特殊染色才能区分出A、B、D细胞。

    八、肝

    (一)肝切片的观察

    取猪的肝切片(H-E染色)并结合肝组织结构模型观察

    1.低倍镜观察 可见许多多边形的肝小叶,小叶间有结缔组织分隔,猪肝小叶分隔比人肝清楚。每个小叶中心有一中央静脉。肝细胞以中央静脉为中心,单行排列成凹凸不平的板状结构(肝板)。但在切片上肝板呈向小叶周边作放射状排列的索,称为肝索。肝索分支相互联接形成网状。肝索之间的不规则空隙即肝窦。用肝组织结构模型观察更易理解上述结构。

    肝小叶间有一些近似三角形的结缔组织区域,其中有三种伴行的管道〔小叶间胆管、小叶间动脉及小叶间静脉),为门管区。

    2.高倍镜观察 选择一比较清晰的肝小叶用高倍镜进一步观察肝索及肝窦结构。

    肝细胞体积比较大,呈多角形,胞核圆形,位于细胞中央,有时可见双核的肝细胞。肝窦的壁由扁平的内皮细胞组成,胞核扁圆形,突入于管腔内。在肝窦内可看到血细胞。

    根据管壁结构在门管区辨别三种管道。小叶间胆管由单层立方或柱状上皮组成,上皮细胞的胞核明显,胞质染色浅淡,所以很容易与小叶间动脉和静脉区分开来。由于这三种管道都可能有分支,因此有时在同一门管区内可见到一个以上的小叶间胆管、小叶间动脉或小叶间静脉的断面。

    (二)示范观察猫肝血管注射切片

    这种切片是从肝门静脉处注射色剂制作的,所以在低倍镜下观察可清晰地显示肝窦的分支吻合成网和与肝小叶中央静脉的连接,同时还可以看到小叶间静脉及小叶下静脉。

    (三)示范观察兔肝窦的肝巨噬细胞

    肝巨噬细胞,又称枯否细胞(Kupffer’scell)。用活体染色方法制作的肝切片观察。高倍镜下观察可见有一些形状不规则的肝巨噬细胞内含有吞噬的活体染料颗粒。颗粒的颜色随所用的活体染料的不同而异。制片时如使用台盼蓝进行活体染色,则可见颗粒为蓝色;如使用中性红(neutral red)或洋红(carmine)染色,则颗粒为红色。

    (四)示范观察用PAS反应制作的兔肝切片

    高倍镜下观察可见肝细胞内含有丰富的紫红色的糖原颗粒。

    (五)示范观察经胆管注射硝酸银制作的兔肝切片 这种切片是用硝酸银经肝的胆管注射制作的。低倍镜下观察可见肝小叶内有许多呈黑色的小分支,分支互相吻合成网,这些黑色小分支即胆小管。在这种切片上,肝细胞不显现颜色。

    (六)示范观察肝细胞电镜结构

    用肝细胞透射电镜图片观察。肝细胞胞质中各种细胞器都较发达,胞核位于细胞中央。注意观察肝细胞三种相邻面的结构。

    讨论区 发布讨论

    作者 标题 时间 评论/阅读
    科研狗 2012-2016 京ICP备16006621 科研好助手,专业的科研社交共享平台