凝血酶原时间(PT)测定实验

待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶,重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子成为X成为Xa。后者使凝血酶原转变为凝血酶,凝血酶使纤维蛋白原转变为凝血不溶性纤维蛋白,测定凝固所需时间、即为待测血浆凝血酶时间(PT)、PT测定是外源性系统理想和常用的筛选实验,也可作为外源性途径凝血固定做定量试验,同时也可用于口服抗凝剂治疗的监控.标本的来源与保存: 静脉采血,置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中,轻轻颠倒混匀.3000rpm(或25O0)离心15分钟,收集上层液(血浆,黄色),标本在不同条件下保存时间如下:-80℃保存,不宜超过3O天,一20℃保存,不宜超过14天,2一8℃保存,不宜超过6小时,22-24℃保存,不宜超过2小时测定.
1. 试剂重建:

于保存每瓶PT试剂加人2.0ml蒸馏水轻摇溶解.注意:试剂溶解后2-8℃可保存7天,室温(15-25℃)可保存24小时,勿冻结.

2. 手工测定:

取待测血浆(参比血浆)0.1ml.37℃孵育2分钟,加入37℃预温凝血活酶0.2ml;混匀,立即启动秒表,记录凝固时间,即为PT值.

3. 血凝仪测定:

请按仪器提供的参数操作

正常值:

1. 以时间表示11-15秒

2. 以PTD表示0.95-1.24

3. 以INR表示0.94-1.30
注意事项
l. 采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管,避免凝血因子活化.

2. 采血时止血带不可束缚过紧并不应超过5分钟,否则导致凝血及纤溶因子活化.

3. 血液应立即加抗凝剂,血浆制备必须及时,血浆分离应尽快去除血小板血浆分离后应尽快测定。

4. 血浆预温不宜超过10分钟.

5. 凝血活酶预温不宜超过30分钟。

6. 用浊度法测定终点的自动化凝血仪,溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果,此时宜用手工法或电子机械或凝血仪测定.

7. 红细胞比容超过55%或小于20%时,应调整抗凝剂用量,抗凝剂体积(ml)=0.00185×血液体积(ml)×(100-比容).

8. 不宜使EDTA·Na2. 肝素,草酸盐抗凝,应使用0.109mol/L拘橼酸钠抗凝。

9. 一80℃及一20℃保存样品,测定时37℃迅速融化,不可反复冻融.

10. 样品采集避免溶血及组织液污染。

11. 建议各实验室建立自己的参考值范围。

12. 手工操作时,凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准.

13. 测定温度36.5-38.5℃过低或过高温度均使PT延长.
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