1. 磷酸缓冲液PBS（pH7.4）：磷酸钠盐 50 mM，NaCl 200 mM。
2. 蛋白酶K（200 μg/ml，pH7.4）：蛋白酶K 0.02 g；PBS 100 ml。
3. 含2%H2O2的PBS缓冲液（pH7.4）：H2O2 2.0 ml；PBS缓冲液 98.0 ml。
4. TdT酶缓冲液（新鲜配）：Trlzma碱 3.63 g用 0.1 N HCl调节pH至 7.2，加ddH2O定容到1 000 ml；再加入二甲砷酸钠 29.96 g和氯化钴0.238 g。
5. TdT酶反应液：TdT酶32 μl；TdT酶缓冲液 76 μl，混匀，置于冰上备用。
6. 洗涤与终止反应缓冲液：氯化钠 17. 4 g；柠檬酸钠 8.82 g；ddH2O 1 000 ml。
7. 0.05%二氨基联苯（DAB）溶液：DAB 5 mg；PBS 10 ml，pH7.4，临用前过滤后，加过氧化氢至0.02%。
8. 0.5%甲基绿（pH4.0）：甲基绿0.5 g；0.1 M乙酸钠100 ml。
9. 100%丁醇，100%、95%、90%、80%和70%乙醇，二甲苯，10%中性甲醛溶液，乙酸，松香水等。
10. 过氧化物酶标记的抗地高辛抗体（ONCOR）。
二、实验步骤
1. 标本预处理
（1）石蜡包埋的组织切片预处理：将组织切片置于染色缸中，用二甲苯洗两次，每次5 min。用无水乙醇洗两次，每次3 min。用95%和75%乙醇各洗一次，每次3 min。用PBS洗5 min 加入蛋白酶K溶液（20 ug/ml），于室温水解15 min，去除组织蛋白。用蒸馏水洗4次，每次2 min，然后按下述步骤2进行操作。
（2）冰冻组织切片预处理：将冰冻组织切片置10%中性甲醛中，于室温固定10 min后，去除多余液体。用PBS洗两次，每次5 min。置乙醇：乙酸（2：1）的溶液中，于-20℃处理5 min，去除多余液体。用PBS洗两次，每次5 min，然后按下述步骤2进行操作。
（3）培养的或从组织分离的细胞的预处理：将约 5 × 107个/ml细胞于 4%中性甲醛室温中固定10 min。在载玻片上滴加 50-100 μl细胞悬液并使之干燥。用PBS洗两次，每次5 min，然后按下述步骤2进行操作。
2. 色缸中加入含2%过氧化氢的PBS，于室温反应5 min。用PBS洗两次，每次5 min。
3. 用滤纸小心吸去载玻片上组织周围的多余液体，立即在切片上加2滴 TdT酶缓冲液，置室温1-5 min。
4、 用滤纸小心吸去切片周围的多余液体，立即在切片上滴加 54 μl TdT酶反应液，置湿盒中于37C反应 1 h（注意：阴性染色对照，加不含TdT酶的反应液）。
5. 将切片置于染色缸中，加入已预热到37℃的洗涤与终止反应缓冲液，于37℃保温30 min，每10 min将载玻片轻轻提起和放下一次，使液体轻微搅动。
6. 组织切片用PBS洗3次，每次 5 min后，直接在切片上滴加两滴过氧化物酶标记的抗地高辛抗体，于湿盒中室温反应30 min。
7. 用PBS洗4次，每次5 min。
8. 在组织切片上直接滴加新鲜配制的0.05% DAB溶液，室温显色3-6 min。
9. 用蒸馏水洗4次，前3次每次1 min，最后1次5 min。
10. 于室温用甲基绿进行复染10 min。用蒸馏水洗3次，前两次将载玻片提起放下10次，最后1次静置30 s。依同样方法再用100%正丁醇洗三次。
11. 用二甲苯脱水3次，每次2 min，封片、干燥后，在光学显微镜下观察并记录实验结果。
