斑点金免疫渗滤测定(DIGFA)实验

斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上,改用胶体金标记物代替酶,省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,将试剂及标本滴加在膜上,通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成,阳性结果在膜上呈红色斑点。
一、试剂及材料
 
1.  渗滤装置:为一塑料小盒(4x3x0.6 cm),分为底、盖两层,盖的中央有一个直径0.5 cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料,盖孔下,紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭盒盖,即为渗滤装置。在孔中的NC膜上点加1-2 ml特异性抗体(一抗)或抗原,室温自然干燥,保存于放干燥剂的密封塑料袋中备用。
 
2.  封闭液:含0.2%BSA和0.05%吐温-20的洗涤液。
 
3.  洗涤液:50 mol/L,pH7.2 PBS。
 
4.  特异性抗体(一抗)或抗原
 
5.  金标抗体
 
二、操作方法
 
1. 取出渗滤器,先在小孔的NC膜上,滴加2滴(约100 ml)封闭液;
 
2. 待其渗入盒内,在NC膜上,加待检标本1滴(约50 ml);
 
3. 待其渗入盒内,在NC膜上,滴加2滴(约100 ml)洗涤液;
 
4. 待其渗入盒内,在NC膜上,加金标抗体1滴(约50 ml),使其与NC膜上吸附的检品发生反应;
 
5. 待其渗入盒内,在NC膜上,滴加2滴(约100 ml)洗涤液;
 
6. 至洗涤液完全渗入盒内
 
三、结果观察
 
在小孔NC膜上出现红色反应时为阳性反应,阴性反应不着色。
 
 
注意事项
1.   特异性抗体(一抗)或抗原、待检标本和金标抗体的用量事先都必须应用方阵法确定最适用量。
 
2.   盒底充填的垫料吸水性要强,否则影响结果。
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