首页 科研工具 试剂配方 Gibson一步克隆,无假阳性,成功率接近100%,彻底淘汰传统酶切连接法,比Gateway更简单。

Gibson一步克隆,无假阳性,成功率接近100%,彻底淘汰传统酶切连接法,比Gateway更简单。

2017-12-02 58 0 收藏

 Gibson一步克隆法,相比Gateway更简单,只需一步,几乎没有假阳性,成功率接近100%,也是市场上一些快速克隆酶(不方便告诉名称)的原理是相同的,但是价格昂贵。特附Gibson原理和配方,有条件的实验室可以试着自己配些,建议分装成7.5 μL/管,载体和片段共2.5 μL,各30-50 ng即可,连接三个以上片段把体系加倍。50 ℃反应30-60 min。注意事项:1,分装时建议在冰上或者4度冷室分装,T5 exonuclease容易失活;2,载体和片段加完以后由于PEG浓度较高,注意混匀后再放入PCR仪或者水浴锅中。

参考文献

Gibson et al.. Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases. DOI:10.1038/NMETH.1318

原文链接

https://www.nature.com/articles/nmeth.1318

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