SnapGene # Gateway®克隆技术简述

我来到你的城市 2021-07-27 09:37:07 阅读: 1567

什么是Gateway®克隆技术?

Gateway®克隆技术是一种基于噬菌体lambda位点特异性重组特性的通用克隆方法(Landy, 1989)。Gateway®克隆技术提供了一种快速、高效的方法将DNA序列转移到多个载体系统中,用于功能分析和蛋白表达(Hartley等,2000年)。

Gateway®克隆技术有哪些优势?

使用Gateway®克隆技术具有以下优点:

  • 使DNA序列快速高效转移到多个载体系统中,以进行蛋白质表达和功能分析,同时保持方向和阅读框架;

  • 允许使用和表达多种类型的DNA序列(如PCR产物,cDNA克隆,限制性片段等);

  • 轻松适应将大量DNA序列转移到多个目标载体中;

  • 适用于高通量(HTP)格式;

  • 允许将你喜欢的载体轻松转换为Gateway®目标载体;

*参考资料:

https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/gatewayman.pdf

https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cloning/gateway-cloning.html

SnapGene如何模拟Gateway®克隆?

Gateway®克隆技术通过重组插入DNA片段,在不使用限制性内切酶的情况下构建质粒。

SnapGene模拟了这种方法的不同变化。

对于标准的Gateway®克隆,将DNA片段通过BP克隆反应插入到Donor Vector中,从而创建入门载体(Entry Vector)。然后将该片段在LR克隆反应中转移至目的载体,从而创建最终的表达载体。多站点Gateway®克隆最多允许同时插入四个片段(如下图)。

 

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SnapGene通过自动引物设计简化了Gateway®克隆程序。换句话说,若你想设计一个Gateway®克隆程序,只需要选择你想加入的DNA片段,SnapGene将自动选择合适的引物。

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