western 做GAPDH的内参,总有杂带

Alsaith 2015-08-31 19:38:39 阅读: 2355
已经做了一个多月的 GAPDH 内参,总是有杂带,我用的是 bioworlde 品牌的一抗,说明书上建议的浓度是 1:5000—1:15000。我第一次做的时候是用 1:5000,结果是有明显的杂带,而且杂带和我要的条带矮得很近;第二次做是 1:7000,杂带明显且与所要条带距离很近;第三次,重新配置一抗,换了一组样,其他条件和前两次一样,条带表带效果不好,但是杂带没有了;从第四次开始,次次出现杂带,而且第四次我的样品和方法与第三次相同。我试了很多方法,比如说增加浓缩胶、加大封闭时间、用封闭液配置一抗,单仍然有杂带......求助各位大神,怎样才能解决,我今年研一刚结束,刚做了一年western,望帮助QAQ
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