杂交信号的放大实验-生物素酰化信号

1.  用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。
 
2.  如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去盖玻片, 并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Triton X-100/4×SSC 15 min,并轻摇。盛液的Coplin 广口瓶外裹以铝箔以避光,如盖玻片不易松动,应小心去除,重复洗涤2次。

3.  吸去载玻片上残余溶液,在载玻片上加50 μl 的1~3 μg/ml 生物素酰化抗亲和素抗体,盖以22 mm2 大小的Parafilm 膜,置加湿盒中,湿盒外裹以铝箔,放37℃温育30 min。

4.  取掉Parafilm 膜,在0.1%Triton X-100/4×SSC中轻摇洗涤15 min。
 
5.  吸去玻片上残液,加50 μl 生物素信号放大溶液,盖以Parafilm 膜。放在裹以铝箔的加湿盒中,于37℃温育30 min。

6.  移去Parafilm 膜,并以0.1%Triton X-100/4×SSC洗涤15 min。然后以4×SSC洗涤15 min,洗涤时应轻轻摇动。
 
7.  复染,加盖玻片,并于显微镜下现察(见“”基本方案,步骤9~12)。
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