显微图像分析仪(Optimas 6.0)的操作实验

在以抗原抗体特异性结合为基础原理的免疫组化实验中,由于不同实验条件影响下抗原量的不同,会使不同动物同一区域组织片的染色图片呈现色彩深度上的差异。在图象分析中,这样的色彩深度差异即表现为单位面积灰度积分值的不同。图象分析的最终目的,即是根据染色深浅导致的灰度值大小不同,来半定量地比较对照组和实验组、各不同条件实验组的组织染色的差异。
1.  在染色片置于光学显微镜下,并用图象捕获软件捕获适当放大倍数下的图象。

2.  在 optimas 中打开图片。

3.  将图片转换成灰度模式。

4. 选定自己所染的目标区域,例如 pvn 区或海马区或 son 区。

5.  确定域值。

6.  指挥计算机根据域值选出符合条件的区域。

7.  将区域的面积、光密度积分值等数据传输到 excel 里。

8.  在 excel 里计算自己所需的目标区域的平均光密度值,并利用它含的统计功能求出统计数值,绘出统计图表
注意事项
在免疫组化结果分析中 Optimas 的几个关键工具
 
当 optimas 被用于免疫组化结果图象的分析时,有几个关键的软件工具是必须重点提一提的。

1.  目标区域选择工具:用鼠标点击这几个工具后,在图上拖动,可以不同的形状选择自己感兴趣的区域,例如正方形,不定形,或椭圆形。

2.  域值调节工具:在灰度模式图象的色彩值中,0表示黑色,255表示白色。当我们调节域值时,电脑根据我们选定的值的范围,选择符合的图象区域,被选中的区域称为前景,呈现黄色,未被选中的,则是背景。
调节域值,可见参照显示标准为域值线。点开域值调节面板后,可以通过拖动上下两个滚动条、鼠标移动,或者手工输入灰度值,来确定自己所需要计算区域的色彩域值。

 
3.  自动区域寻找工具:设定域值后,点击此工具,软件会根据域值在目标区内自动生成符合要求的小区域,以红线圈出。此区域也就是我们将从中收集数据的区域。
 
4.  数据收集设置:可在此面板中设定所需收集的数据类型,数据输出后的目标软件。

 
5.  宏记录工具:利用此工具,可以将自己需要反复进行的操作记录下来,以后执行每一次相同操作时,运行宏即可以。

 
 
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