农杆菌感受态细胞制备实验-电转农杆菌感受态

创建日期:2013-10-11 查看:496
实验原理
实验步骤
一、试剂配制

1 mM HEPES的配制:称取0.119 g HEPES(MW 238.3)粉末,加水溶解,定容至500 ml,用NaOH调pH至7.0,灭菌后待用。

二、实验步骤

1.  挑取单克隆接种于2 ml YEP(含50 mg/l链霉素)液体培养基,28℃,250 rpm,振荡培养过夜。(如用5 mlYEP,需培养36 h)
 
2.  将菌液按1:100转移至200 ml YEP(含50 mg/l链霉素)培养液中,28℃,250 rpm,振荡培养至OD=0.3(约4~5 h)。
 
3.  转入50 ml的无菌离心管,4℃,4 000 rpm离心10 min,弃上清。
 
4.   用20 ml冰浴的HEPES(1 mM,PH7.0)重悬。
 
5.  4℃,4 000 rpm离心10 min,弃上清。
 
6.  重复4、5步骤2~3次。
 
7.  用2 ml冰浴的10%甘油重悬。
 
8.  每管100 μl分装于1.5 ml无菌的Eppendorf管中,-70℃保存。
 
 
 
 
注意事项
1.  HEPES需现用现配。
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