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细胞培养方法(五):冻存细胞的复苏
冻存细胞的复苏
1. 细胞复苏的原则
在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。
2. 所需材料
含有细胞的冻存管
· 37℃水浴锅
· 37℃预热的生长培养基
3. 细胞的复苏流程
1)．佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出冷冻管。
2)．迅速放入37℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化，然后在无菌下取出细胞。
3)．在150g速度下离心5～10分钟，弃去上层液
4)．加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×109 cell/L，置37℃温箱静置培养
5)．次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。
6)．若细胞密度较高，及时传代。
4. 注意事项
在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。
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