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胰岛素耐受试验中胰岛素购买问题

发布:2016-08-31 16:34 | 查看:587 | 回复:0
李某某某要发粪:hello 大家好 有人在做胰岛素耐受的么?大家用的胰岛素都是从哪里买的?鸿鹄:我们细胞实验是诺和诺德的,从医院购买的 

Sal I和Xba I双酶切与甲基化的问题

发布:2016-08-31 16:44 | 查看:2009 | 回复:1
Min: 师兄师姐你们好,这是我酶切位点的序列,中间隔了一个酶,6个碱基,请问这种情况SalⅠ和xbaⅠ双酶切理论上可以切开吗?许柏森:应该可以的~只要不是贴得太近金成一:理论上可以,实际其实也可以,以前就做过,而且平时DNA构建时,在载体MCS上酶切经常会碰到两个很近的酶切位点,看酶要用的Buf,你SalI和XbaI所用的buf不一样,分别切会比较高效,其他酶切位点如果buf一样,就一

甲基化缺陷型菌购买问题

发布:2016-08-31 16:47 | 查看:580 | 回复:0
Min: 这甲基化缺陷型菌(DM1(Invitrogen)、INV110(invitrogen)、JM110  )贵不贵啊?怕太贵老板不让买Jeebnn:全式金trans110,便宜的。 

质粒测序少了100多bp

发布:2016-09-01 23:23 | 查看:711 | 回复:0
可乐:大家好,我想咨询一个关于测序方面的问题。我的片段1500左右,测序时正向测序信号中断,反向测序成功~我比对了一下反向成功的序列,基本都正确。但正向少了100多bp。那么我还能用这个保种的继续下一步么?金成一:担心的话最好在正向设计多一个primer测序,靠中间些,但是离你那没测出的一百多bp最好远一点,或者你用这个基因的qRT-PCR的primer来用于测序也可以成功的,那就不需要再麻烦设计

培养基被真菌污染了,用0.22um滤膜能过滤掉不?

发布:2016-09-01 23:36 | 查看:1282 | 回复:2
丹丹:我的培养基被真菌污染了。我想知道能用0.22的滤膜滤掉吗?Dr.Gao: 有血清吗?金成一:过滤是可以过滤掉,但是你的培养基是不是比较珍贵的那种?不是的话,觉得重新做个新的会不会好点?丹丹:没有血清,有细胞因子和霍乱霉素,一瓶500ml要5000多rmb金成一:5000多。。。那你还是尽快用0.22um的过滤吧丹丹:我倒是过滤了,一遍够吗?金成一:过滤两次wb-慌慌:可以先拿一株不用的细胞试

请教Graphpad 绘制柱形图的问题

发布:2016-09-04 21:00 | 查看:843 | 回复:0
康康:请教如何将所有的CT 在一块的?粒粒: 

请问有谁用过《医学多变量统计与统计软件》?

发布:2016-09-04 21:02 | 查看:567 | 回复:0
有谁用过这本书没?很厚吗?实用价值高没? 

求帮助~有人做过MMP-2 western blotting吗

发布:2016-09-04 21:44 | 查看:692 | 回复:0
冰淇淋:我的MMP-2条带,在100-135有条带,在67/72没有目的条带,100-135之间的条带可能是二聚体吗?慌慌:MMP2本身条带是多大?抗体说明书上给出的位置又是多少?冰淇淋:说明书上写的是64/72的位置慌慌:样品里面有没有阳性对照冰淇淋:没有科研狗:做western blot之前首先要确定抗体是不是好使,所以一般来说你需要有MMP2的带有标签的质粒,在细胞中表达之后做好阴性对照,用

hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin

发布:2016-09-04 22:02 | 查看:1151 | 回复:0
LM(李大蒙):hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin   hU6我查到人源启动子,是不是指这个病毒载体是针对人源细胞的?金成一: 那个h应该是human的意思没错LM(李大蒙):哦,那只能对人的细胞了?金成一:我平时用U6 promoter的时候都没注意看前面是不是m,我平时用的都是mouse细胞,所以估计你那个是针对人细胞 

请教各位大神,不小心把蛋白煮了俩小时,还能用不?

发布:2016-09-04 22:16 | 查看:1113 | 回复:0
袁富文:请教各位大神,不小心把蛋白煮了俩小时,还能用不?科研狗:我以前遇见过。。。只要里面没有干,跑出来还可以。我是煮了90分钟慌慌:是放在水浴锅里面煮的吗?这么久。可以尝试用PCR来煮蛋白,设定好温度,不用担心时间问题,到时间自动保温金成一:煮两小时!可以熬一顿猪骨汤了王娜:没煮干吗金成一:我也有同样疑问,其实煮二三十分钟,tube里面的水分就都到tube盖顶了。莫非连盖都一起加热煮。袁富文:没

细胞培养中小黑点是细菌不?

发布:2016-09-04 22:23 | 查看:712 | 回复:0
LM(李大蒙):小黑点是细菌不?两盘细胞都满满的小黑点,用左氧杀了一盘。对比一下,小黑点明显减少金成一:什么细胞来的?LM(李大蒙):正常人肝细胞系金成一:你们的培养液一般加不加penicilin-streptomycin等抗生素的?LM(李大蒙):加金成一:那就不是很轻楚黑点是啥了!如果想知道黑点是不是生物,把细胞较低速离心,取上清液来培养看看会增值不我也很有兴趣知道黑点是啥哈哈。感觉黑点不会那

各位大神,这个问题如何回复?

发布:2016-09-05 17:51 | 查看:807 | 回复:0
15DLBL:“In your previous query response 'The 3'-UTRs of CCND1 were amplified by PCR using the following primers: 5'-GTACTGGAGAATGTGCCCTGCGGCA-3' and 5'-AGCTCGRGTAAGGCTCTGCACCCGC-3’

PMSF 的使用问题

发布:2016-09-07 15:15 | 查看:711 | 回复:1
虾米虾米:PMSF都是使用前数分钟内加入到裂解液中吗?如果加入之后在-20放置一两周,还能用吗?熊XX:我见过有的实验室是加好放在-20用,也没什么问题虾米虾米:额,因为看到有人说放久了会没作用,所以问下~但是如果是一两周,应该关系不大吧~熊XX:我见过别人是配好 分装到1.5的管子 每次用就拿出一管来 

有人做过transwell和划痕实验吗?

发布:2016-09-07 19:44 | 查看:643 | 回复:0
熊XX:有人做过transwell和划痕实验吗金成一:划痕以前做过!测某试剂对细胞移动or生长速度的影响!熊XX:怎么划的比较好金成一:用1ml的那种tip,在无菌台上,手指直接捏稳tip粗大的一端,tip的尖端垂直于长满细胞的培养皿,个人觉得最好是3.5或6cm的dish,从上往下对半在培养皿上划下去,注意用力均匀就好,否则划出来的痕不平行。然后换添加有你需要测试药物的培养液进行培养。然后在显微

小鼠内框取血怎样才能得到更多的血清呢?

发布:2016-09-09 15:18 | 查看:854 | 回复:2
不懂小姐Zola:眼眶取血怎么得到多一点的血清呢?哪位大侠有好的办法阿布:是熟练活,我们实验室用内径0.9mm的玻璃采血管引流能取到400ul左右的血,小鼠。言中无陌:一般可以取到1.5ml, 700微升到1.5ml,看小鼠的状态.Irene Gao: 我们一般体重25g可以800ul不懂小姐Zola: 大鼠呢?取完血之后凝固半小时再离心,一般转速多少?dean: 3000g 15min.阿布:哦

PCR产物2900bp,TA克隆总是连不上怎么回事?

发布:2016-09-09 15:28 | 查看:766 | 回复:0
石俊超吓葰:各位大神,我的pcr产物2900bp,要连接到PMD18-T载体测序,为什么总是连接不上去呢?金成一:你primer后面设计用是什么酶?石俊超吓葰:高保真酶金成一:哈哈,我指的是ECORIO, NotI 这些酶。你用的那两个酶切位点?石俊超吓葰:没有酶切,加A后,TA连接。金成一:TA链接那种啊?这几天研究室刚好有人做,我看他们做得挺顺利的,用的是TA链接专用的kit!不过我没亲自做过

研究血液中免疫因子的时候用什么样的管收集血液?

发布:2016-09-09 15:37 | 查看:740 | 回复:1
深情款款:科研小白求助:群里的大神们有没有做免疫因子的,比如说IL- 17,这个是应该用什么颜色的管啊,我看文献有用肝素钠的,也有用枸橼酸钠的,请问各位有做过的同行们都是用的什么管收的血啊?张爱民:促凝管都可以深情款款:喔喔,谢谢老师。深情款款:啊,不对,文献说要加抗凝剂啊。为什么是促凝管呢?深情款款:还有一个问题:如果用流式来检测淋巴细胞的话,可不可以先不分离淋巴细胞,以肝素钠抗凝后-80℃冻存

膜蛋白提取的问题

发布:2016-09-10 14:03 | 查看:682 | 回复:0
三缄其口:请教一下,我的目的蛋白是膜蛋白,之前试过直接加裂解液+细胞刮提蛋白,但western一直没结果,所以想重新提蛋白,请问各位关于提取膜蛋白的好建议吗?麦兜在路上:有试剂盒,找找三缄其口:碧云天的好用吗?可乐:我们实验室用的是碧云天的,感觉还行三缄其口:是用来提膜蛋白的那款吗?可乐:我们用的是碧云天的一抗熊XX:三缄其口:@熊XX 请问你养的是悬浮细胞吗?熊XX:不是,293T,你可以借鉴下

公位MPH和学硕哪个更好?

发布:2016-09-12 18:06 | 查看:679 | 回复:0
交大医-公卫-12: 公位MPH和学硕哪个更好?飞蓬将军:各有各的优势王越 汕大医学院MPH研一:只要能发好文章 都不错Riana发发 吉大:MPH和学硕的培养方式有什么区别嘛?王越 汕大医学院MPH研一:有写MPH实验也要 现场实践也要。要看学校和老师C浆果蘑菇r08级通大毕业:在职的目前预防只有同等学历申硕士wxid_n0uk15k3w2zd22: 公卫的没有看到硕士学位的?C浆果蘑

细胞培养中可否不加二氧化碳?

发布:2016-09-12 18:10 | 查看:648 | 回复:0
谭二月-水生生物学:小伙伴们你们好,我有个问题想请教一下。我们做实验用dmem/f12培养基,可是没有做实验的那个地方没有二碳箱,不知道加上hepes是否可以不用二碳箱?清风:@谭二月-水生生物学 你是说细胞培养没有二氧化碳培养箱么?谭二月-水生生物学:对啊对啊,周一终于有人上班回复我啦!。清风:@谭二月-水生生物学 细胞的生长条件通常是37℃,5%的二氧化碳,hepes是调解培养基的ph值的,这

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