用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验
1. 用含10%胎牛血清的完全培养液稀释处于指数生长期的Sf9细胞至约5×106细胞/ml。在蚀斑试验之前几小时，以两个不同的密度将细胞种于60 mm 组织培养皿中。病毒毒种贮液的每--稀释度均设复孔，于27℃培养。
2. 如下用无血清完全培养液制成5 ml 的病毒贮液的系列稀释液：
（1）纯病毒毒种贮液：10-6、10-7、10-8稀释
（2）转染上清：10-4、10-5和10-6稀释
（3）单个蚀斑：10-1、10-2和10-3稀释
3. 用一根灭菌巴斯德吸管小心从细胞中吸去培养液。每一稀释度的病毒均加1 ml 至各复孔中，于室温或27℃温育1 h，间断摇动以保证病毒和覆盖在细胞上的培养液均匀分布。
4. 温育30 min 后，准备琼脂糖顶层覆盖物。
5. 用一根灭菌巴斯德吸管吸去病毒上清液，加入4 ml 琼脂糖覆盖物，让琼脂糖于室温固化10~20 min 。用Parafilm 膜封住毎个平板（以防干涸），于27℃ 培养4~8天。
6. 在蚀斑形成较好而且裸眼容易看出的培养皿上，计数系列中的每一稀释度形成的烛斑数，计算病毒滴度。
7. 如果裸眼辨别蚀斑时遇到困难，则用台盼蓝染色。准备台盼蓝覆盖物，倾覆1 ml 至培养了3~5天、蚀斑形成较好的培养皿中。于27℃过夜温育培养皿，让染料扩散进入死细胞。计数蓝色蚀斑的数目并确定病毒滴度。
