半数致死量的测定实验

1.预备实验

①摸索上下限:即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量(Dm)和一个动物也不死亡的最大剂量(Dn)。方法是据经验或文献定出一个估计量,观察 2~3 只动物的死亡情况。如全死,则降低剂量;如全不死,则加大剂量再行摸索,直到找出 Pm = 100% 和 Pn = 0% 的剂量,此两量分别为上下限。

②确定组数,组距及各组剂量

组数:一般 5-8 组,可根据适宜的组距确定组数,如先确定 5 组,若组距过大,可再增加组数以缩小组距。有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。

组距:指相邻两组剂量对数之差,常用“d”来表示。d不宜过大,因过大可使标准误增大;也不宜过小,因过小则组数增多,各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。敏感性大者,死亡率随剂量增加(或减少)而增加(或减少)的幅度大,组距可小些;反之,敏感性小者,死亡率随剂量变化的幅度小,则组距应大些。上下限之间的距离可做为敏感性大小的标志。距离大,说明敏感性小;距离小,则说明敏感性大。一般要求d 应小于 0.155,多在 0.08~0.1 之间。

确定组距方法:把上下限的剂量换算成对数值,设上限剂量的对数值为 X k, 下限剂量的对数值为 X1,组数为 G 则:

确定各组剂量:由X1逐次加逐 d(或 X k 逐次减 d), 得出各组剂量的对数值,再分别查反对数:即得出各组剂量(呈等比级数排列)。

③配制等比药液,并使每只动物在给药容量上相等(如 0.5ml/20g)。

2.正式实验

①实验动物的选择与分组

选择原则:可据不同实验而选取动物,应选择对被试因素敏感的动物。同时也应考虑动物来源,经济价值及操作简便等条件。LD50常用小白鼠进行实验来测得。

分组原则:每组动物数必须多于组数。因为每组动物数如少于组数, 就不能充分反映各组死亡率的差别。(如共 8 组,每组 10只动物,高剂量三个组的死亡数分别为 6、9、10,但如每组只用 6 只动物,则高剂量三个组的死亡数可能都是 6。)我们此次实验将动物分成 7组,每组 10 只小鼠。

分组方法:见附录,实验对象分组法。首先,按性别将动物雌雄分开或各半混合编组,然后按体重分群,再随机分组,力求使各组平均体重相等。我们此次实验直接按体重分群,再随机分组。

②给药、观察死亡数、求出死亡率

给药途径:可据不同药物及动物而定,小白鼠多用腹腔注射或灌胃法;也可静脉注射。我们此次实验采取腹腔注射的方法。

给药顺序:宜采取间隔跳组方法。如共 7 组,先按 2、4、6 组顺序给药,然后逆行按 7、5、3、1 组的顺序给药。这样可避免因药物放置过久或动物饥饿造成的偏向性误差。

而且当第3组给药后,如第 2 组动物已经全死,则可省下第 1 组动物及 1 号药液。如第 7组已死亡,可补做第 8 组,争取做出 0%死亡率的组来。每只动物的给药容量可按个体体重或平均体重确定。我们此次实验各组动物同时给药。

观察时间:直到动物不再因药物作用而死亡为止。在观察期间应注意保证食、水、温度等生活条件,严防非被试因素引起的死亡,一般需要观察一周时间。我们此次实验观察一小时。


1.剂量与死亡频数的关系:是一条中间高,两侧低,右侧延长较远的曲线(图 4-16a)2.对数剂量与死亡频数的关系:是正态分布曲线(图 4-16b)。

3.剂量与死亡率的关系:是一条长尾“S”形曲线(图 4-16d)。

4.对数剂量与死亡率的关系:是一正“S”形曲线(图 4-16c)。

从对数剂量与死亡频率的正态分布中(4-16b)可见,LogLD50恰在正态曲线中点所对应的横轴上,按此剂量给药动物恰好死亡一半。因在正态曲线中,其中点恰是均数所在处,所以LogLD50就是全部实验动物最小致死剂量对数的算术平均值(也是真数剂量的几何平均值)。从对数剂量与死亡率关系的正S形曲线(图4-16c)中可见,LogLD50恰为正S形曲线中点所对应的横轴上的对数值, 因此正S形曲线中点对应的纵轴(死亡率)恰为50%。这条曲线的特点是:①死亡率为 50%(即 LD50)时的斜率最大,由于其位于曲线中央,故灵敏度最高。②曲线两端平坦,接近 0%或100%附近灵敏度最差,剂量不易确定,而且即使确定了也常不可靠。所以采用半数致死量做为判定某因素毒性大小的指标是恰当的。总之,如果求出正态曲线中点所对应的横轴上的对数值或正S形曲线中点所对应的横轴上的对数植,即可求出LogLD50及 LD50。

公式推导:根据对数剂量与死亡率关系的量数曲线,通过面积法可得出公式:

科研狗©2015-2024 科研好助手,京ICP备20005780号-1 建议意见

服务热线

178 0020 3020

微信服务号