乙酸丙酮法血清甘油三酯测定实验

本法用异丙醇抽提血清TG,氧化铝吸附磷脂及游离甘油氢氧化钾皂化,过碘酸钠氧化生成甲醛,甲醛与乙酸丙酮在氨离子存在下加热生成黄色的 3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶〔Hantgsch止反应)显色程度与标本中TG浓度成正比。
一、实验试剂:

1. 异丙醇(分析试剂)

2. 氧化铝(中性、层分用):用蒸馏水洗数次,倾去不易下沉的细颗粒,吸滤干后在110℃烘箱中活化至少8h,贮存于密闭容器或干燥器中

3. 50g/L 氢氧化钾,内含异丙醇40%

4. 氧化剂:每升中含有无水醋酸铵77g 冰醋酸60ml,过碘酸钠650ml

5. 显色剂:乙酰丙酮0.75ml,异丙醇20ml,用蒸馏水稀释至100ml,贮存棕色瓶内

6,三油酸甘油酯标准液(2.26mmol/l即200g/dl)精确称取纯三油酸甘油酯200mg,用异丙醇配成100ml,紧塞贮4℃冰箱中

二、实验操作:

1. 抽提:方法同胆固醇相同

2. 皂化、氧化,显色、测定管与标准管分别加人相应的抽提液1.0ml,空

白管中加异丙醇lml,各管中加人5Og/LKOH溶液O.2ml皂化,放置60℃水浴15min,冷却后加入氧化剂0.5ml,混匀后加人显色剂O.25ml,再混合,置60℃水浴中20min,取出冷却。

3. 比色:波长410nm 1cm光径比色杯,以空白管调零,读取各管光密度。

三、计算:

血清甘油三酯=测定管吸光度/标准管吸光度×标准浓浓度
注意事项
1. 本法所用的皂化. 氧化. 显色等试剂都很稳定,在室温中可保存半年,但最好少量分装使用,以减少试剂污染引起空白管色加深.

2. 皂化. 氧化与显色的温度和时间对显色后的吸光度均有影响.因此每批标本都须做好标准管,而不宜从标准曲线查得结果,显色后的吸光度基本稳定,显色放在室温20℃不避光的条件下,吸光度略会增高,但对测定结果影响不大。

3. 甲醛以乙酸丙酮反应产物的吸收峰在415nm,用721型分光光度计时,420nm比色结果满意。

4. 本法回收试验及重复性好,准确性能符合临床要求。
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