核酸的定量测定实验-地衣酚显色法
RNA 与浓盐酸共热时发生降解, 产生的核糖又可转变为糖醛, 在FaCl3 或CuCl2 催化下, 糖醛与3 , 5-二羟基甲苯( 地衣酚、苔黑酚)反应形成绿色复合物, 该产物在670 nm 处有最大吸收。当RNA 浓度为20～250 μg/ ml 时光密度与RNA 浓度成正比。
1. RNA 标准曲线的制作: 取试管6 支, 按下表所示添加试 剂。
加毕混匀, 于沸水浴中加热20 min , 取出置自来水中冷却, 以零号管为对照, 于670 nm 处测光密度值。以光密度为纵坐标, RNA 浓度为横坐标作图, 绘制标准曲线。
2. 样品测定: 取试管3 支, 两支为样品管, 一支为空白管, 在样品管中加入1 . 0 ml 样品液, 空白管操作与标准曲线制作中零 号管相同。样品管再加3 . 0 ml 地衣酚试剂, 混匀, 置沸水浴中加 热20 min , 取出冷却。以空白管调零点, 于670 nm 处测光密度 值, 根据光密度值从标准曲线上查出相应的RNA 含量。根据下 式计算出样品中RNA 的百分含量。
