测定氨基糖苷类抗生素的残留量实验

1.  前处理
 
称取2 g样品于50 mL聚丙烯离心管,加入3 mL磷酸盐缓冲液(10 mmol/L KH2PO4含0.4 mmol/LEDTA和2%三氯乙酸),均质(30~60 s)。塞紧,激烈振荡l0 min。在4000 r/min下离心10 min。将上清液转入另一离心管,残渣中加入10 mL磷酸盐缓冲液/TAC,混合,激烈振荡l0 min。离心,合并上清液。将合并的上清液用30%NaOH调节pH至7.5~8.0。离心,如需要可用角匙去掉上面的脂肪。
 
SPE(BakerBondSPEWidePoreCB,500 mg)柱净化:将SPE柱装好后,用 5 mLMeOH和5 mL水淋洗。加入样品使流速为1~3 mL/min,用4~5 mL水淋 柱,抽干5 min。氨基糖苷类抗生素用3 mLl0%乙酸/甲醇洗脱1l5 mL玻璃离心管。在40 ℃下用氮气浓缩至约0.1 mL,在室温下用氮气吹干。加入0.4 mL5 mmol/L HFBA,混合后超声15 min,在2500 r/min下离心10 min,转入另一0.6 mL聚丙烯离心管,在16000 r/min下离心10 min。小心移出大约一半上清液自动进样瓶。
 
2.  仪器条件
 
色谱柱:内径为2.1mm,长100mm的反相C18,3.5um粒径;
 
流动相:流速0.15 mL/mm,初始5%MeOH,75%水,20%100 mmol/LHFBA。
 
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