动物源食品中四环素类兽药多残留测定实验

1.  提取
 
动物肝脏、肾脏、肌肉组织、水产品:称取均质试样5 g(精确到0.01 g),置于50 mL聚丙烯离心管中,分别用约20 mL、20 mL、1O mL、0.1  mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(0.1 mol/L。称取60.5 g乙二胺四乙酸二钠放入1625mL Mcllvaine缓冲溶液中,使其溶解,摇匀)低温超声提取三次,3000 r/min,5 min离心(温度低于15 ℃),合并上清液(注意控制总提取液的体积不超过50 mL),并定容至50 mL,混合,5000 r/min,离心10 min(温度低于15 ℃),过滤,待净化。
 
牛奶:称取混匀试样5 g(精确到0.01 g),置于50 mL聚丙烯离心管中,用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解并定容至50 mL,旋涡混合1 min,低温超声10 min,冷却至4 ℃, 5000 r/min,离心10 min (温度低于15
 ℃),过滤,待 净化。
 
2.  净化
 
准确吸取10 mL提取液以1 滴/s的速度过Waters Oasis HLB (60 mg,3 mL)固相萃取柱,待上清液完全流出后,依次用5 mL水和5 mL甲醇-水(5 + 95)淋洗,弃去全部流出液。减压抽干5 min,最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯(10 + 90)洗脱。将洗脱液吹氮浓缩至干(温度小于30 ℃),用1.0 mL标准稀释液溶解残渣,低温超声5 min,过0.45 um滤膜,供高效液相色谱/串联质谱仪测定。
 
3.  5HPLC 测定条件
 
色谱柱:Inertsi1 C8-3,5 um,150  mm×2.1  mm;
 
流动相:甲醇,乙腈,0.01 mol/L三氟乙酸,洗脱梯度见表3-11(柱平衡时间5 min);


 
流速:1.5 mL/min;
 
柱温:30 ℃;
 
进样量:30 uL。
 
4.  HPLC-MS/MS 测定条件
 
色谱柱:Inertsil C8-3,50 m,150 mm × 2.1 mm; 
 
流速:0.3 mL/ min;
 
柱温:30 ℃;
 
进样量:300 L;
 
流动相:甲醇 + 0.01 mol/L三氟乙酸。
 
离子化模式:ESI+ ;
 
质谱分辨率:单位分辨率;
 
雾化气(NEB):6.0 L/min;
 
气帘气(CUR):10.0 L/min;
 
喷雾电压(IS):4500 V;
 
去溶剂温度(TEM):500
 ℃
 
去溶剂气流:700 L/min;
 
碰撞气(CAD):6.0 L/min(氮气)。
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