细胞融合实验

细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendaivirus),聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚,它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。
1.  取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成10%的悬液。

2.  称取0.5克PEG(MW=4 000)放入试管内,在酒精灯上融化之,迅速加入0.5 ml 预热的Hanks液混匀制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。

3.  取上述10%的鸡红细胞悬液1 ml 放入离心管中,再加入5 ml Hanks液混匀,然后以1 000 rpm 离心5分钟,小心弃去上清,用指弹法将细胞团块弹散。

4.  取上述50%PEG溶液0.5 ml,在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液,边加边轻轻摇动混匀。待PEG全部加入后静置1分钟左右。此全部过程都要求在37℃水浴内进行。

5.  缓慢滴加9 ml Hanks液以终止PEG的作用,在37℃水浴内静置5分钟。

6.  离心弃上清后,取一滴融合后的细胞悬液滴片,加盖片镜检。

7.  结果观察:在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起,形成一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。

8.  融合率的计算:在高倍镜下随机计数200个细胞(包括融合的与未融合的细胞),以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的细胞)的细胞核数除以总细胞核数(包括融合与未融合的细胞核)即得出融合率。公式如下:
 
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